细菌持留性分子机制：基础理论与实验指导

　　持留菌是细菌在生长过程中随机形成的规模小、呈休眠状态且高度耐受抗生素的菌体亚群。已有实验证明，细菌持留性与临床上细菌慢性感染及耐药性的产生相关。由于细菌持留性的分子机制复杂多变，给人类健康带来诸多挑战。作者从细菌持留性的基本概念、分子机制研究及相关实验操作等方面进行了系统介绍，重点讨论了开展细菌持留性科学研究的相关方法，以及不同分子机制实验研究的具体操作规程。本教材阐释系统、图表简洁，兼具理论指导性和实际操作性，可作为国内高等院校开展相关微生物学实验教学的指导用书，也可供从事细菌持留性相关研究的科研人员借鉴参考。

　　周建华，博士，副研究员，硕士研究生导师。任职于西北民族大学生物医学研究中心，主要研究方向为病原生物学与基因工程。先后主持国家自然科学基金 2 项、甘肃省自然科学基金 1 项、优秀青年团队培育项目 1 项、西北民族大学引进人才科研项目 1 项及企业横向研究课题 1 项。以第一发明人身份获发明专利 1 项，主译专著《细菌持留状态研究方法与操作规程》，以第一作者或通讯作者身份于 SCI 期刊发表学术论文 7 篇，于 CSCD-C 中文期刊发表学术论文 4 篇。 马晓霞，博士，副教授，硕士研究生导师。先后担任西北民族大学生命科学与工程学院、生物医学研究中心教师，曾赴荷兰鹿特丹伊拉兹马斯大学医学中心肝病与肠道病研究组短期访学。主要研究方向为病毒基因工程与病原遗传学。先后主持甘肃省教育厅科技项目 1 项、中央高校基本业务科研项目 2 项，参与国家自然科学基金 4 项、国家创新团队项目及科技重大专项各 1 项。主编教材 2 部，以第一作者或通讯作者身份于 SCI 期刊发表学术论文 21 篇（累计影响因子 40 分），于CSCD-C 中文期刊发表学术论文 3 篇。

目  录 
第 1 章  细菌持留性的基础知识  001 
一、细菌持留性的概念 001 
二、细菌持留性的研究现状及展望 002 
第 2 章  持留菌形成的分子机制概论  004 
一、毒素 - 抗毒素系统 004 
二、遗传因素对持留菌形成的影响 006 
三、生物被膜形成的分子机制 007 
四、细菌“社区”网络的形成 010 
第 3 章  持留菌生物表型的鉴定  013 
一、Ⅰ型 / Ⅱ型持留菌生物表型的鉴定 013 
二、持留菌分离及鉴定的实验操作 014 
三、ScanLag 实验法对Ⅰ型 / Ⅱ型持留菌的定量测定 017 
第 4 章  重要持留菌形成的分子机制与临床疾病  020 
一、大肠杆菌持留性的分子机制 020 
二、沙门菌持留性的分子机制 023 
三、鲍曼不动杆菌持留性的分子机制 030 
四、结核分枝杆菌持留性的分子机制 034 
五、铜绿假单胞菌持留性的分子机制 036 
六、肺炎克雷伯菌持留性的分子机制 037 
七、金黄色葡萄球菌持留性的分子机制 040 
八、白念珠菌持留性的分子机制 043 
第 5 章  持留菌研究经典实验技术  045 
一、基因定点突变技术的实验操作 045 
二、持留菌基因敲除技术的实验操作 049 
三、针对持留菌的免疫荧光与激光共聚焦技术 054 
四、核酸探针筛选基因文库的实验操作 057 
五、荧光活化细胞分选的实验操作 061 
六、微型液滴矩阵对持留菌的检测与收集 066 
七、生物被膜形成定量检测的实验方法 070 
第 6 章  大肠杆菌持留性研究的常用实验技术  074 
一、常规实验方法分析大肠杆菌持留状态的操作规程 074 
二、优化实验方法进行大肠杆菌持留性分析的操作规程 076 
三、毒素 - 抗毒素系统关键位点鉴定的实验操作 080 
四、周期性抗生素处理诱导持留性大肠杆菌形成的实验操作 084 
五、小鼠泌尿道持留性大肠杆菌感染模型的建立 087 
第 7 章  其他重要持留菌相关研究的经典实验操作  095 
一、持留性铜绿假单胞菌高通量筛选的实验操作 095 
二、金黄色葡萄球菌生物被膜体外模型的建立 099 
三、金黄色葡萄球菌转座子文库构建的实验操作 101 
四、鲍曼不动杆菌持留性鉴定的实验操作 106 
五、白念珠菌生物被膜中持留菌检测的实验方法 109 
第 8 章  细菌 - 真菌混合产生生物被膜诱导持留菌产生的实验操作 113 
一、表皮葡萄球菌 - 白念珠菌混合产生生物被膜的实验操作 113 
二、铜绿假单胞菌 - 烟曲霉混合产生生物被膜的实验操作 117 
参考文献 120