生物工程基础实验

　　《生物工程基础实验指导》主要介绍生物工程主要专业实验课程的基本操作技术与实验手段，包括生物化学实验、分子生物学实验、基因工程实验、酶与蛋白质工程实验、发酵工程实验、生物分离工程实验等。该书将各相关实验与其对应的理论课程有机结合起来，形成既具有一定理论体系又具有一定通用性和指导性的教学实验用书，强调对实验结果的分析与讨论，引导学生通过查阅文献资料来对比和验证实验结果，及时反思和分析既有的实验方案和思路，有利于培养学生在实验中的严谨性和规范性，充分激发和培养学生的独立思考能力、创新能力以及“存疑”和“求异”精神。

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第一章 常用仪器设备及使用  001
一、PCR 仪的原理及使用方法  001
二、台式离心机的使用  003
三、分光光度计原理及使用  005
四、自动核酸蛋白分离色谱仪  008
五、电泳仪的使用  011
六、凝胶成像系统的使用  017
七、旋转蒸发器的使用  018
八、索氏提取器  020
九、微波-超声波合成萃取仪  021
十、气相色谱-质谱联用仪  023
十一、BT 系列蠕动泵  025
第二章 生物化学实验  028
实验一 甲醛滴定法  028
实验二 糖的定量：3,5-二硝基水杨酸比色法  030
实验三 植物组织中可溶性总糖的测定  033
实验四 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳  035
实验五 蛋白质的沉淀反应  037
实验六 肝脏谷丙转氨酶活力测定  038
实验七 维生素C 的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）  041
实验八 粗脂肪提取和含量测定  043
实验九 动物组织中脱氧核糖核酸的制备及测定  045
第三章 分子生物学实验  048
实验一 DNA 的琼脂糖凝胶电泳  048
实验二 紫外分光光度法分析DNA 浓度与纯度  050
实验三 CTAB 法提取植物基因组DNA  052
实验四 SDS 法提取植物基因组 DNA  053
实验五 大肠杆菌基因组DNA 的提取  055
实验六 绿色荧光蛋白基因的PCR 扩增  057
实验七 硅胶膜吸附法纯化DNA 片段  060
第四章 基因工程实验  062
实验一 质粒DNA 的提取与检测  062
实验二 质粒DNA 的酶切反应  067
实验三 琼脂糖凝胶电泳回收DNA 片段  070
实验四 目的DNA 片段与载体的连接反应  072
实验五 大肠杆菌感受态细胞的制备  076
实验六 大肠杆菌感受态细胞的转化  079
实验七 阳性克隆的筛选和鉴定  082
实验八 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达  085
实验九 SDS-PAGE 检测表达蛋白  089
第五章 酶与蛋白质工程实验  094
实验一 过氧化氢酶活性的测定  094
实验二 淀粉酶的提取和活性测定  096
实验三 胆绿素还原酶的修饰与活性基团鉴定  099
实验四 壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶  100
实验五 溶菌酶的制备及活力测定  103
实验六 酶法澄清苹果汁加工工艺优化  105
实验七 酵母细胞固定化  106
实验八 pH 对酶活力的影响——最适pH 的测定  108
实验九 温度对酶活力的影响——最适温度的测定  110
实验十 酵母中蔗糖酶的提取及活性测定  112
第六章 发酵工程实验  115
实验一 自然界中发酵菌株的分离  115
实验二 淀粉酶发酵菌种的初筛  117
实验三 液化型淀粉酶活力的测定  118
实验四 液化型淀粉酶发酵菌种的紫外诱变育种  121
实验五 发酵菌种的复壮和保藏  122
实验六 正交实验法优化生产菌株发酵培养基的配方  124
实验七 生长曲线和产物形成曲线的测定  126
第七章 生物分离工程实验  129
实验一 牛乳中酪蛋白的提取及含量测定  129
实验二 维生素A 的提取及含量测定  132
实验三 大蒜细胞SOD 酶的提取与分离  136
实验四 香菇多糖的提取、纯化及含量测定  141
实验五 离子交换树脂总交换容量的测定  143
实验六 离子交换柱色谱分离混合氨基酸  148
实验七 PEG/硫酸盐双水相系统相图制作  152
实验八 PEG/(NH4)2SO4 系统中蛋白质分配系数测定  154
实验九 胰蛋白酶的提取与激活  158
实验十 胰蛋白酶的酶活和比活测定  161
实验十一 反胶束萃取技术提取胰蛋白酶  164
附录一 常用碱基符号  168
附录二 常用氨基酸符号  169
附录三 常用缓冲液的配制  170
附录四 常用上样缓冲液配制  173
附录五 常用电泳缓冲液的配制  174
附录六 常用试剂的配制  175
附录七 常用缓冲液母液或储存液  178
附录八 常用抗生素  179
附录九 硫酸铵饱和度计算及加入方式  180
参考文献  182