生物工程实验指南

　　本书是按照专业设置的生物工程实验教学新体系教学用书之一。全书分为实验和实训两部分。实验部分包括生物活性分子的分离、提取、鉴定及活性检测，微生物的分离纯化、鉴定及影响其生长的因素，基因的克隆、分子标记，产酶微生物筛选、产酶条件优化，酶的提取、固定与活性功能基团的化学修饰以及酶特性分析，重组蛋白的制备，抗体的纯化与检测，外源基因的转染表达，细胞水平的药物筛选，淀粉质原料制备乙醇，抗生素、多糖、有机酸的发酵生产，植物组织培养。实训部分包括机械搅拌式发酵罐综合实训、物料的粗粉碎与超微细粉碎、产物分离精制综合实训。书后附有常用单位换算表、常用AFLP选择性扩增引物、几种植物外植体培养的培养基配方、过滤除菌法、生物工程常用试剂的配制、常用培养基的配制。

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目 录
**篇 实 验 部 分
实验一 磷脂的分离纯化3
实验1-1 卵磷脂的提取3
实验1-2 薄层层析法检测卵磷脂5
实验二 红霉素的提取分离及效价测定9
实验2-1 有机溶剂萃取法制备硫氰酸红霉素9
实验2-2 大网格树脂吸附法提取红霉素12
实验2-3 无机盐对再生型双水相体系萃取红霉素分配系数的影响15
实验2-4 比色法测定红霉素效价18
实验三 木姜叶柯黄酮的提取及测定22
实验3-1 超声波辅助法提取木姜叶柯黄酮22
实验3-2 乙醇回流法提取木姜叶柯黄酮24
实验3-3 微波辅助法提取木姜叶柯黄酮26
实验3-4 木姜叶柯黄酮的含量测定29
实验四 超临界法萃取青蒿素及纯度测定32
实验4-1 利用超临界CO2 流体萃取青蒿素32
实验4-2 HPLC 法测定青蒿素纯度35
实验五 番茄红素的提取分离及含量测定38
实验5-1 蔬菜中番茄红素的提取分离38
实验5-2 分光光度法测定番茄红素的含量40
实验六 咖啡因的提取分离及测定43
实验6-1 乙醇萃取法提取分离咖啡因43
实验6-2 HPLC 法检测咖啡因含量45
实验七 微生物的分离纯化和鉴定48
实验7-1 从土壤中分离和纯化微生物48
实验7-2 利用细菌16S rDNA 序列分析鉴定其属51
实验7-3 细菌的生理生化反应56
实验7-4 细菌生长曲线的测定59
实验7-5 真菌ITS 序列分析鉴定61
实验八 环境因素对微生物生长的影响65
实验九 小鼠TLR2 基因的克隆68
实验9-1 小鼠肝脏总RNA 提取68
实验9-2 RT-PCR、扩增产物纯化与琼脂糖凝胶电泳鉴定71
实验9-3 RT-PCR 产物克隆75
实验9-4 转化子的筛选及PCR 鉴定77
实验9-5 重组质粒提取与酶切鉴定80
实验十 AFLP 分子标记实验技术84
实验10-1 基因组DNA 的制备、酶切及接头连接84
实验10-2 PCR 扩增及产物电泳鉴定87
实验十一 酸性磷酸酯酶的特性分析93
实验11-1 酶促反应进程曲线的制作和酶活力测定93
实验11-2 酸性磷酸酯酶的Km 和Vmax 测定98
实验11-3 离子交换层析法纯化酸性磷酸酯酶101
实验11-4 SDS-PAGE 测酸性磷酸酯酶的相对分子质量105
实验十二 酵母蔗糖酶的提取与活性功能基团的化学修饰 111
实验12-1 酵母蔗糖酶的提取、分离与纯化 111
实验12-2 酵母蔗糖酶的包埋及固定化酶活性测定114
实验12-3 酵母蔗糖酶活性功能基团的化学修饰117
实验十三 产纤维素酶微生物筛选、产酶条件优化、纤维素酶基因的克隆分析119
实验13-1 产纤维素酶微生物的分离与初步鉴定120
实验13-2 产纤维素酶菌种的筛选与保藏122
实验13-3 酶活测定与传代保藏124
实验13-4 产纤维素酶菌种的紫外诱变育种127
实验13-5 正交试验设计优化产纤维素酶菌种的产酶条件129
实验13-6 产纤维素酶细菌菌株酶基因克隆分析133
实验十四 酶的固定化、酶传感器、酶反应器及其应用137
实验14-1 酶的固定化及酶传感器的制备及应用137
实验14-2 酶反应器设计及酪蛋白水解物的制备139
实验14-3 酶法澄清苹果果汁加工工艺优化142
实验十五 多克隆抗体的纯化与检测145
实验15-1 兔血清的分离145
实验15-2 多克隆抗体的硫酸铵分级粗纯化148
实验15-3 抗体的蛋白质G 亲和纯化150
实验十六 利用毕赤酵母制备重组蛋白154
实验16-1 酵母转化子的活化及少量培养154
实验16-2 重组茯苓免疫调节蛋白的镍亲和纯化156
实验16-3 重组茯苓免疫调节蛋白的DEAE 离子交换纯化158
实验十七 外源基因在哺乳动物细胞中的表达162
实验17-1 脂质体介导的外源基因细胞转染162
实验17-2 蛋白质免疫印迹法检测外源基因在细胞中的表达164
实验十八 基于细胞水平的药物筛选169
实验18-1 MTT 法检测药物对细胞活力的影响169
实验18-2 平板克隆形成实验检测药物对细胞增殖的影响171
实验18-3 划痕实验检测药物对细胞迁移的影响173
实验十九 淀粉质原料乙醇发酵175
实验19-1 淀粉质原料乙醇摇瓶发酵175
实验19-2 乙醇的蒸馏178
实验19-3 发酵液中乙醇含量的检测181
实验二十 柠檬酸发酵184
实验20-1 柠檬酸摇瓶发酵185
实验20-2 柠檬酸的提取——柠檬酸钙的制备187
实验20-3 柠檬酸的检测189
实验二十一 α-淀粉酶发酵193
实验21-1 α-淀粉酶摇瓶发酵193
实验21-2 α-淀粉酶活力测定195
实验二十二 青霉素发酵200
实验22-1 青霉素摇瓶发酵200
实验22-2 抗生素效价评定203
实验二十三 茯苓多糖发酵及检测205
实验23-1 茯苓多糖摇瓶发酵205
实验23-2 茯苓多糖的提取208
实验23-3 硫酸-苯酚法测定茯苓多糖210
实验二十四 植物组织培养213
实验24-1 MS 培养基母液和培养基的配制213
实验24-2 外植体灭菌、接种与培养218
实验24-3 继代培养221
实验24-4 愈伤组织再分化芽的培养223
实验24-5 生根培养225
实验24-6 试管苗的驯化与移栽230
实验24-7 植物细胞悬浮培养233
第二篇 实 训 部 分
实训一 机械搅拌式发酵罐综合实训239
实训1-1 发酵罐结构的认知239
实训1-2 发酵罐的灭菌240
实训二 物料的粗粉碎与超微细粉碎243
实训2-1 粗粉碎243
实训2-2 超微细粉碎244
实训三 产物分离精制综合实训246
实训3-1 高速管式离心机246
实训3-2 降膜式蒸发器247
实训3-3 喷雾干燥249
主要参考文献251
附录1 常用单位换算表253
附录2 常用AFLP 选择性扩增引物254
附录3 几种植物外植体培养的培养基配方255
附录4 过滤除菌法258
附录5 生物工程常用试剂的配制260
附录6 常用培养基的配制271