葡萄抗病基因功能研究

　　葡萄白粉病菌是危害葡萄生产的重要真菌病害之一。目前生产上栽培的主要是欧洲葡萄品种，这些品种品质优良且产量高，但抗病性差。我国具有丰富的野生葡萄种质资源，并携带大量的抗病基因。本研究以中国野生华东葡萄高抗白粉病株系白河35-1为材料，克隆了泛素连接酶基因UIRP1基因及其启动子；研究了UIRP1基因及其启动子对病原菌的响应模式；分析了UIRP1基因的泛素连接酶活性及其亚细胞定位情况；筛选到一个与UIRP1相互作用的转录因子基因VpWRKY11；进一步分析了二者相互作用模式，并探讨了二者在植物抗病反应中的作用。

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序
前言
第一章 引言
第一节 植物免疫系统
一、植物先天免疫系统
二、植物后天免疫系统
第二节 泛素/26S蛋白酶体系统及其功能
一、泛素化过程
二、不同类型的泛素连接酶
三、26S蛋白酶体
四、泛素/蛋白酶体途径在植物防御反应中的作用
第三节 研究目的与意义
第二章 材料与方法
第一节 试验材料
一、植物材料
二、质粒载体与菌株
三、主要试剂
四、引物
五、培养基与试剂配制
第二节 试验方法
一、生物信息学分析
二、载体构建
三、农杆菌介导的遗传转化
四、病原菌接种与病情调查
五、核酸分子操作方法
六、蛋白操作方法
七、酵母双杂交试验
八、亚细胞定位试验
九、转录因子转录激活分析
十、双分子荧光互补（BiFC）试验
十一、蛋白质体内降解试验
十二、启动子活性检测试验
第三章 结果与分析
第一节 UIRP1基因的克隆与序列分析
一、UIRP1基因的克隆
二、UIRP1基因序列分析
第二节 UIRP1基因对病原菌的响应
第三节 UIRP1基因的原核表达与酶活性分析
一、UIRP1基因的原核表达
二、UIRP1基因的酶活性分析
第四节 UIRP1基因的亚细胞定位分析
第五节 UIRP1基因启动子的克隆与功能分析
一、UIRP1基因启动子的克隆与序列分析
二、UIRP1基因启动子功能分析
第六节 UIRP1基因互作蛋白的筛选
一、诱饵表达载体的构建、毒性检测与自激活分析
二、病原菌诱导的酵母表达cDNA文库构建
三、杂交筛选UIRP1基因的互作蛋白
第七节 BiFC验证UIRP1基因与互作蛋白转录因子基因VpWRKY11的相互作用
第八节 UIRP1基因的互作蛋白转录因子基因VpWRKY11的功能分析
一、转录因子基因VpWRKY11的序列分析
二、转录因子基因VpWRKY11的亚细胞定位分析
三、转录因子基因VpWRKY11的转录激活分析
四、转录因子基因VpWRKY11对病原菌的响应
第九节 UIRP1基因与互作蛋白转录因子基因VpWRKY11的相互作用模式分析
一、UIRP1基因作用在转录因子基因VpWRKY11的上游
二、UIRP1基因在体内降解转录因子基因VpWRKY11
第十节 UIRP1基因在拟南芥中过量表达分析
一、转UIRP1基因拟南芥的鉴定与表型分析
二、转UIRP1基因拟南芥的抗病性鉴定
三、转UIRP1基因拟南芥中抗病相关基因的表达分析
第四章 讨论
第一节 关于泛素连接酶基因研究
第二节 关于UIRP1基因参与植物抗病反应
第三节 关于UIRP1基因与有关转录因子基因的相互作用
第四节 关于转录因子基因参与抗病的反应方式
第五节 关于UIRP1基因作用底物
第六节 关于UIRP1基因泛素化转录因子基因VpWRKY11调控葡萄的抗病性
第五章 结论
参考文献