分子微生物学实验指导

　　本书共包括十四章，包括微生物核酸提取，聚合酶链反应，载体连接转化，大肠杆菌表达，分子杂交，DNA和蛋白质相互作用等目前分子微生物学领域常用的实验技术，章节顺序安排基本参照常规实验的流程。每个章节在概述部分对实验原理进行了详细阐述，便于读者对实验步骤的理解；在实验步骤中，结合前人经验总结了部分注意事项，可供广大读者进行参考；每章结尾均有思考题，可用于实验的复习和加深理解；书末还附录有本书所涉及的质粒图谱及微生物常用培养基配方，可供读者参考。

　　柳志强，男。海南大学环境与植物保护学院副教授，研究方向为微生物天然产物分离与应用；植物病害生物防治；微生物功能基因。李晓宇，女。海南大学环境与植物保护学院副教授，研究方向为分子微生物学；分子植物病理学。

目 录
第一章 琼脂糖凝胶电泳
一、实验材料
二、实验仪器
三、操作步骤
四、技术要点
第二章 基因组DNA的提取
一、从植物组织提取基因组DNA
二、从动物组织提取基因组DNA
三、细菌基因组DNA的制备
四、丝状真菌基因组DNA的制备
五、酵母基因组DNA的制备
六、基因组DNA的检测
第三章 RNA的提取和cDNA合成
一、动植物组织mRNA提取
二、植物病毒RNA提取
三、丝状真菌RNA提取
四、细菌RNA提取
五、酵母RNA提取
六、cDNA的合成
第四章 聚合酶链反应（PCR）
一、常规PCR技术
二、降落PCR
三、RACE技术
四、实时荧光定量PCR
第五章 DNA酶切
一、实验材料
二、实验仪器
三、操作步骤
四、技术要点
第六章 重组质粒的连接
一、实验材料
二、实验仪器
三、操作步骤
四、技术要点
第七章 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
一、CaCl2法制备感受态细胞及转化
二、大肠杆菌超级感受态细胞的制备
三、电转化感受态细胞的制备及转化
第八章 质粒DNA的提取
一、实验材料
二、操作步骤
三、技术要点
第九章 聚丙烯酰胺凝胶电泳
一、实验材料
二、实验仪器
三、操作步骤
四、技术要点
第十章 融合蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化
一、实验材料
二、实验仪器
三、操作步骤
四、技术要点
第十一章 分子杂交技术
一、核酸探针标记的方法
二、Southern 杂交
三、Northern 杂交
四、Western 杂交
五、菌落原位杂交
六、斑点杂交
七、杂交反应的条件及参数的优化
第十二章 RFLP和RAPD技术
一、RFLP技术
二、RAPD技术
第十三章 EMSA实验方案
一、实验试剂
二、操作步骤
第十四章 酵母双杂合系统筛选相互作用的蛋白
一、实验材料与方法
二、阳性克隆的进一步证实
三、注意事项
附录一 质粒图谱
附录二 常用微生物培养基配方
参考文献