生物化学与分子生物学实验技术

　　本教材是以培养学生学习生物化学与分子生物学实验技能为主要目的的实验指导书。遵循先理论后实践的原则，编写的宗旨为简明、实用。我们以实验教学改革为指导，加强了生物化学基本技能训练和综合性实验。全书分为三大部分：第一部分简要介绍生物化学实验的基本知识；第二部分为生物化学与分子生物学基本实验原理和技术，其中包括分光光度技术、离心技术、层析技术、电泳技术和其他分子生物学基本技术；第三部分为生物化学与分子生物学实验。各学校可根据不同教学层次和对象、实验教学课时酌情选用。附录列出常用生物化学试剂的配制方法，可供有关人员查阅参考。本实验指导主要是为配合基础生物化学教材而编写，所涉及的技术面比较广泛，可供临床医学、医学检验、影像学、预防医学、生物科学、生物技术等相关学科本科学生使用。

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第一部 分生物化学与分子生物学实验基本知识1
第一节 生物化学与分子生物学实验室规则1
第二节 生物化学实验的基本操作3
第二部 分生物化学与分子生物学实验原理与技术7
第一节 分光光度法7
第二节 离心技术15
第三节 层析技术27
第四节 电泳41
第五节 分子克隆49
第六节 聚合酶链式反应(PCR)54
第七节 核酸分子杂交技术62
第三部 分生物化学与分子生物学实验71
第一节 生物化学基本实验71
实验1 双缩脲法测定蛋白质浓度71
实验2 Folin酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度74
实验3 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量76
实验4 紫外分光光度法测定蛋白质79
实验5 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳81
实验6 预染血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳86
实验7 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清乳酸脱氢酶同工酶88
实验8 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)92
实验9 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点97
实验10 影响酶活性的因素100
实验11 蔗糖酶的专一性103
实验12 底物浓度对酶促反应速度的影响——过氧化氢酶Km的测定105
实验13 抑制剂对酶促反应速度的影响109
实验14 血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定(赖氏法)111
实验15 血清甘油三酯含量的测定——乙酰丙酮法114
实验16 血浆高密度脂蛋白（HDL）胆固醇含量的测定116
实验17 酮体的生成118
实验18 运动对全血乳酸含量的影响120
第二节 生物化学综合实验122
实验19 激素对血糖浓度的影响122
实验20 血清γ球蛋白的分离与纯度鉴定126
实验21 血清清蛋白的分离及电泳鉴定130
实验22 核酸的分离提取、成分鉴定及含量测定133
第三节 分子生物学实验148
实验23 大肠杆菌感受态细胞制备及外源DNA的转化148
实验24 质粒DNA的提取152
实验25 质粒DNA的限制性内切酶酶切154
实验26 DNA的琼脂糖凝胶电泳157
实验27 PCR基因扩增159
实验28 Southern杂交分析162
实验29 Northern杂交分析166
附录169
附录Ⅰ 化学试剂分级及注意事项169
附录Ⅱ 常用缓冲液配制方法170
附录Ⅲ 重铬酸洗液的配制与再生173
参考文献175