基因打靶技术

　　基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段。它的产生和发展建立在胚胎干细胞技术和同源重组技术成就的基础之上，并促进了相关技术的进一步发展。自20世纪80年代早期胚胎干细胞技术建立及15年前第一例基因剔除小鼠诞生以来，基因打靶的研究进展迅速，给现代生物学和医学研究带来了革命性的变化，并直接引发了现代生物学和医学研究各个领域中许多突破性的进展，成为后基因组时代研究基因功能最直接和最有效的方法之一。作者参阅了大量国内外近期文献资料，并结合近年来的工作实践，比较全面地介绍了基因打靶技术的发展及常用的研究策略，力求反映本研究领域最新的研究进展。书中附有基因打靶研究中常用的实验方法和常用数据库，可供从事现代生物学和医学领域的研究和技术人员、教师和研究生参阅。

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1 基因打靶技术的发展简史及其应用前景
1.1 基因打靶技术的概念
1.2 胚胎干细胞技术的发展
1.3 同源重组技术的发展
1.4 基因打靶技术在生物医学研究中的应用前景
2 基因打靶的策略及载体设计
2.1 完全基因剔除
2.2 基于CRE-LOXP重组酶系统的条件基因打靶技术
2.3 用基因打靶技术引入精细突变
2.4 大片段染色体的重排和删除
2.5 随机基因剔除-基因诱捕
2.6 ENU诱导点突变与大规模基因突变和功能研究
2.7 利用基因敲入技术制备转基因动物
3 中靶胚胎干细胞的筛选
3.1 胚胎干细胞的分离和培养
3.2 打靶载体转染ES细胞
3.3 ES细胞的体外诱导分化研究
4 由中靶细胞突得突变体动物的方法
4.1 通过囊胚显微注射法获得嵌合体小鼠
4.2 通过胚胎聚合法获得完全ES细胞来源的胚胎或嵌合体小鼠
5 基因打靶在现代生物学研究中的应用实例
5.1 应用基因剔除技术研究SMADS基因的功能
5.2 葡萄糖激酶基因剔除及成年型糖尿病模型
5.3 人类疾病的基因打靶小鼠模型
5.4 核移植法研制突变体动物
6 基因打靶技术存在的问题及对策
6.1 打靶载体设计引起的问题
6.2 表型解释中存在的问题
6.3 关于解决基因打靶研究中粗乃的问题的建议
6.4 总结
7 附录1 常用实验方法
7.1 靶基因CDNA探针的克隆
7.2 靶基因基因组DNA片段的筛选和克隆
7.3 NORTHERN杂交分析
7.4 小鼠的基因型分析
7.5 常规组织学分析
7.6 免疫组化分析
7.7 普通原位杂交
7.8 整体原位杂交
7.9 小鼠的全骨架制备
7.1 利用藏红O染色检测小鼠骨切片中蛋白多糖的含量
7.11 小鼠组织的LAC Z染色
8 附录2 常用溶液和缓冲液的配制
8.1 常用试剂的配制
8.2 杂交试验中用于降低背景的封闭液
8.3 蛋白水解酶类
8.4 M2和M16溶液的配制
9 附录3 常用参考书和数据库
9.1 常用参考书
9.2 常用基因打靶和转基因小鼠资源网站
后记